測定BOD5時水樣稀釋法分一般稀釋法和直接稀釋法兩種，其中一般稀釋法需要使用的稀釋水或接種稀釋水數量較多。

  一般稀釋法是在1L或2L量筒中，加入稀釋水或接種稀釋水約500mL，然后加入計算而得的一定體積的水樣，再加稀釋水或接種稀釋水到滿量程，用末端裝有橡皮圓片的玻璃棒在水面下慢慢作上提或下沉式攪動，最后用虹吸管將已經混合均勻的水樣溶液引入培養瓶中，并使充滿溢出少許，小心蓋緊瓶塞，并水封瓶口。對第二或第三個稀釋倍數的水樣，可利用剩余的混合液，經計算后在添加一定量的稀釋水或接種稀釋水，用同樣的方法混合并引入培養瓶。

  直接稀釋法是先以虹吸法在已知容積的培養瓶中引入約一半容積的稀釋水或接種稀釋水，然后沿瓶壁注入根據稀釋倍數計算出的每一培養瓶中應加入的水樣體積，再引入稀釋水或接種稀釋水至瓶頸，小心蓋緊瓶塞，并水封瓶口。

  使用直接稀釋法時，特別要注意最后引入稀釋水或接種稀釋水時一定不能過快。同時要摸索引入最適體積的操作規律，避免過量溢出而產生的誤差。

  無論使用哪中方法，在將水樣引入培養瓶時，動作必須要輕緩，避免發生氣泡，以防空氣溶入水中或水中氧氣溢出。同時要保證在蓋緊瓶蓋時一定要細心，避免瓶內留有氣泡而影響測定結果。培養瓶在培養箱內培養時，每天都要檢查其水封情況，及時填水，以防止封口水份蒸干而使瓶內進入空氣。此外，5d前后使用的兩個培養瓶的體積必須相同，以減小誤差。